動物組織や血液からmiRNAを抽出するためのキットは市販されていますが、植物組織からのmiRNA抽出に適したキットの選定にお困りではありませんか？
そこで当社では、植物組織からのmiRNA抽出に当社の核酸抽出キットが使用可能か検討しました。
実験データ
詳細なプロトコール、実験データは以下(PDF)よりご覧ください。
[対象試料]
①シロイヌナズナの葉(ロゼット葉未形成)
②生茶葉
[対象製品]
(1) ISOSPIN Liquid Sample miRNA （small RNAのみ抽出）
(2) ISOGEN with Spin Column （Total RNAを抽出）
(3) ISOGEN （Total RNAを抽出）
*植物からのTotal RNA抽出キットの「ISOSPIN Plant RNA」は、原理上small RNAの抽出には適さないため対象外としました。
[結果]
吸光度測定結果（試料：①シロイヌナズナ）
| 抽出試薬 | 抽出対象の 核酸 | RNA収量 （試料50 mgあたり） | RNA濃度 | A260/A280 | A260/A230 |
|---|---|---|---|---|---|
| (1) ISOSPIN Liquid Sample miRNA | small RNA | 6.39 μg | 127.74 ng/μL | 2.07 | 1.93 |
| (2) ISOGEN with Spin Column | Total RNA | 36.94 μg | 738.81 ng/μL | 2.17 | 2.46 |
| (3) ISOGEN | Total RNA | 35.34 μg | 706.84 ng/μL | 1.97 | 2.50 |
吸光度測定結果（試料：②生茶葉）
| 抽出試薬 | 抽出対象の 核酸 | RNA収量 （試料50 mgあたり） | RNA濃度 | A260/A280 | A260/A230 |
|---|---|---|---|---|---|
| (1) ISOSPIN Liquid Sample miRNA | small RNA | 6.75 μg | 134.92 ng/μL | 2.07 | 1.24 |
| (2) ISOGEN with Spin Column | Total RNA | 39.11 μg | 782.25 ng/μL | 2.18 | 2.38 |
| (3) ISOGEN | Total RNA | 38.97 μg | 779.47 ng/μL | 1.98 | 2.26 |
[まとめ]
各製品から、シロイヌナズナからmiRNAであるath-miR159b-3p を検出でき、茶葉からもmiRNAであるcsn-miR167b-5pを検出できました。
データ掲載はしておりませんが、液体窒素を使用してサンプルを破砕することが一番のポイントでした。
また、「ISOSPIN Liquid Sample miRNA」と「Assist Buffer for ISOSPIN Plant RNA」の組み合わせでは、ほとんどRNAが得られませんでした。
※Assist Bufferは、ISOSPIN Plant RNAを用いて植物組織からRNAを抽出する際に併用する補助試薬です。